一、新物體識別介紹

對象位置任務(wù)（OLT）和新穎物體識別任務(wù)（NORT）是兩種常用的有效行為任務(wù)，它們用于揭示參與記憶的特定腦區(qū)的功能和相對健康狀況。雖然這兩種測試都利用了老鼠對新穎性的天生偏好來揭示對先前遇到的物體的記憶，但OLT主要評估空間學(xué)習(xí)，這在很大程度上依賴于海馬體活動。相比之下，NORT評估的是非空間學(xué)習(xí)的物體識別，這依賴于多個腦區(qū)。

OLT（對象位置測驗(yàn)）是一種簡單而有效的測試，可提供海馬依賴性空間記憶的度量。該任務(wù)依賴于動物對新奇性的固有偏好，而不需要額外的外部強(qiáng)化，因此通?？梢员苊馀c不同情緒反應(yīng)相關(guān)的復(fù)雜性。該協(xié)議包括讓小鼠適應(yīng)曠場測試區(qū)域，然后允許其與空間環(huán)境線索相關(guān)的2個物體進(jìn)行探索。然后，將小鼠從測試區(qū)域移出，在延遲（試驗(yàn)間隔或ITI）期間，移動其中一個物體的位置。ITI結(jié)束后，將小鼠重新引入測試區(qū)域，并允許其自由探索。總體而言，小鼠更喜歡新奇性，如果它們記得初始暴露時物體的位置，它們將花更多時間調(diào)查移動的物體。海馬損傷的動物在空間背景學(xué)習(xí)方面存在缺陷，因此在新位置不會對物體表現(xiàn)出偏好。

OLT可以獨(dú)立使用，也可以與另一種依賴多個腦區(qū)神經(jīng)活動的記憶測試相結(jié)合，即新對象識別任務(wù)（NORT）。NORT與OLT相同，直到測試階段，其中一個物體被一個新物體替換，而不是被移到新位置。與OLT一樣，記得物體的小鼠會自發(fā)地更喜歡調(diào)查新物體。與強(qiáng)烈依賴海馬底物的對象位置記憶不同，對象識別記憶似乎依賴于多個腦區(qū)，并且海馬的參與尚未解決。許多研究報告稱，海馬損傷或失活不會影響新對象的偏好，而其他研究發(fā)現(xiàn)相反。然而，它仍然是評估嚙齒動物一般記憶功能的常用任務(wù)。

二、新物體識別實(shí)驗(yàn)protocol

1.測試前一周：

讓小鼠熟悉進(jìn)行行為測試的人員

每天處理6至9周齡的成年雌雄C57Bl/6小鼠1分鐘，持續(xù)3-5天。

2.第一天：習(xí)慣化會話

2.1將小鼠分為4組，將它們移到單獨(dú)的干凈飼養(yǎng)籠中。

2.2將它們帶入測試房間，讓它們至少適應(yīng)測試房間30分鐘。

2.3當(dāng)適應(yīng)完成并且實(shí)驗(yàn)人員準(zhǔn)備好開始時，開始使用行為學(xué)分析軟件（如VisuTrack）錄制并分析視頻。

2.4將每只小鼠放置在場地（每個場地一只小鼠）面向釋放角的墻壁。

2.5讓小鼠自由探索場地6分鐘。

2.6停止錄制視頻。

2.7在試驗(yàn)間隔期間將小鼠返回它們的干凈固定籠中。

2.8使用動物設(shè)施推薦的清潔方法清潔所有場地，例如用70%的酒精擦拭以最小化嗅覺線索。

重復(fù)步驟2.3–2.8再進(jìn)行兩次，為每只小鼠進(jìn)行總共3次習(xí)慣化會話。

2.9將所有小鼠返回它們的飼養(yǎng)籠中。

2.10使用動物設(shè)施推薦的清潔方法（如使用70%的乙醇擦拭）清潔所有曠場，以最大限度地減少第二天使用前的嗅覺線索。

3.第二天：訓(xùn)練測試

3.1 24小時后，將同一組老鼠帶入測試室，并讓它們適應(yīng)測試室至少30分鐘，和前一天習(xí)慣化訓(xùn)練前的操作一樣。

3.2 使用2個放置在曠場中的物體進(jìn)行訓(xùn)練試驗(yàn)。

3.3 使用雙面膠帶，將物體固定在兩個非釋放角落的6×6厘米處，使它們在曠場中平衡并且不會被小鼠移動。

3.4 開始使用行為學(xué)分析軟件（如VisuTrack）錄制并分析視頻。

3.5 將每只老鼠面向釋放角落的墻壁放置，和前一天習(xí)慣化訓(xùn)練前的操作一樣

3.6 允許老鼠自由探索曠場和物體10分鐘。

3.7 停止錄制視頻。

3.8 將老鼠放回它們的干凈保持籠子中，間隔時間（ITI）為20分鐘。

3.9 使用動物設(shè)施推薦的清潔方法（如使用70%的乙醇擦拭）清潔所有曠場和物體，以最大限度地減少嗅覺線索。

4 第二天:進(jìn)行OLT

訓(xùn)練測試后進(jìn)行OLT。

將訓(xùn)練試驗(yàn)中使用的一個物體移動到新的非釋放角落，并使用雙面膠帶將物體固定在那個角落的每個墻壁距離6厘米的位置。

注意：只需要移動一個物體，另一個物體應(yīng)該和訓(xùn)練試驗(yàn)期間的位置一樣，保持不變。

4.1使用行為學(xué)分析軟件（如VisuTrack）錄制并分析視頻。

4.2將每只老鼠面向釋放角落的墻壁放置。

4.3允許老鼠探索物體10分鐘。

4.4停止錄制視頻。

4.5將老鼠放回它們的干凈保持籠子中，間隔時間（ITI）為20分鐘。

4.6 使用動物設(shè)施推薦的清潔方法（如使用70%的乙醇擦拭）清潔所有曠場和物體，以最大限度地減少嗅覺線索。

5.進(jìn)行NORT

OLT結(jié)束后進(jìn)行NORT。

5.1用一個新的物體替換OLT期間未移動的物體，并使用雙面膠帶將這個新物體固定在角落的兩面墻壁距離6厘米的位置。

5.2使用行為學(xué)分析軟件（如VisuTrack）錄制并分析視頻。

5.3將每只老鼠面向釋放角落的墻壁放置。

5.4允許老鼠探索物體10分鐘。

5.5停止錄制視頻。

5.6將老鼠放回它們的飼養(yǎng)籠子。

5.7使用動物設(shè)施推薦的清潔方法（如使用70%的乙醇擦拭）清潔所有曠場和物體，以最大限度地減少下次使用前的嗅覺線索。

三、 分析行為測試數(shù)據(jù)

注意：視頻分析理想情況下應(yīng)由至少兩名獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)人員完成。

打開視頻文件。

在屏幕上應(yīng)用一個透明圓圈，圍繞每個物體提供2厘米的邊界，以幫助確定主動探查。使用在曠場放置尺子的視頻文件圖像來校準(zhǔn)這個距離。

觀察老鼠的行為，并記錄老鼠主動探查物體的時間，包括它的鼻子指向物體，距離該物體最大2厘米。

記錄老鼠開始探查物體的時間點(diǎn)和停止探查物體的時間點(diǎn)。并計算老鼠探查每個物體的累積時間。

計算總探查時間的百分比 =（與新位置或物體的時間）/（與新位置或物體的時間 + 與熟悉位置或物體的時間）×100

注意：超過50%的值表明對新位置或物體的探查更多。

計算區(qū)分指數(shù) =（與新位置或物體的時間 - 與熟悉位置或物體的時間）/（與新位置或物體的時間 + 與熟悉位置或物體的時間）

注意：正值表明更多時間用于探查新物體。區(qū)分指數(shù)為零表示與兩個物體花費(fèi)相同的時間。

使用t檢驗(yàn)或ANOVA等統(tǒng)計分析方法，根據(jù)比較的群體數(shù)量適當(dāng)?shù)貓D形表示結(jié)果并完成統(tǒng)計分析。